书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犅 ２０ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 １４９２４ ． １０ — ２００８ 代替 ＧＢ ／ Ｔ１４９２４．１０ — ２００１ 实验动物 　 配合饲料 氨基酸的测定 犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔犪狀犻犿犪犾 — 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犪犿犻狀狅犪犮犻犱狊犳狅狉犳狅狉犿狌犾犪犳犲犲犱狊 ２００８  １２  ０３ 发布 ２００９  ０３  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准自实施之日起代替 ＧＢ ／ Ｔ１４９２４．１０ — ２００１ 《 实验动物 　 配合饲料 　 氨基酸的测定 》。 本标准与 ＧＢ ／ Ｔ１４９２４．１０ — ２００１ 相比主要技术差异如下 ： ａ ） 　 按照 ＧＢ ／ Ｔ２０００１．４ — ２００１ 《 标准编写规则 　 第 ４ 部分 ： 化学分析方法 》 对原标准的文字进行 了修改 ； ｂ ） 　 对原引用的标准进行调整 ； ｃ ） 　 并对原标准中的错误进行了改正 。 本标准由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口 。 本标准起草单位 ： 全国实验动物标准化技术委员会 。 本标准主要起草人 ： 张瑜 、 贾建斌 、 周瑞华 、 王竹 、 王国栋 、 刘源 。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为 ： ——— ＧＢ ／ Ｔ１４９２４ — １９９４ ， ＧＢ ／ Ｔ１４９２４．１０ — ２００１ 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １４９２４ ． １０ — ２００８ 实验动物 　 配合饲料 氨基酸的测定 １ 　 范围 本标准规定了实验动物配合饲料中氨基酸的测定方法 。 本标准适用于实验动物小鼠 、 大鼠 、 兔 、 豚鼠 、 地鼠 、 犬和猴的配合饲料及其原料中氨基酸的测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ５００９．１２４ 　 食品中氨基酸的测定 ＧＢ ／ Ｔ１５４００ 　 饲料中色氨酸测定方法 　 分光光度法 ＧＢ ／ Ｔ１８２４６ — ２０００ 　 饲料中氨基酸的测定 ３ 　 测定方法 ３ ． １ 　 配合饲料中氨基酸的测定 按 ＧＢ ／ Ｔ１８２４６ — ２０００ 或 ＧＢ ／ Ｔ５００９．１２４ 中相关规定执行 。 ３ ． ２ 　 配合饲料中色氨酸的测定 ３ ． ２ ． １ 　 第一法 　 高效液相色谱法 按 ＧＢ ／ Ｔ１８２４６ — ２０００ 附录 Ａ “ 色氨酸的测定 　 反相高效液相色谱法 ” 规定执行 。 ３ ． ２ ． ２ 　 第二法 　 荧光分光光度法 ３ ． ２ ． ２ ． １ 　 原理 在蛋白质的碱水解液中 ， 只有色氨酸和酪氨酸可以检测到荧光 。 在 ｐＨ 为 １１ 时 ， 色氨酸的荧光强 度比酪氨酸大 １００ 倍 ， 且色氨酸与酪氨酸荧光峰相差 ４０ｎｍ 以上 。 根据该特点 ， 采用碱水解法处理蛋白 质 ， 然后通过测定色氨酸的天然荧光 ， 对色氨酸进行定量分析 。 ３ ． ２ ． ２ ． ２ 　 试剂 除另有说明外 ， 所有试剂均为分析纯 ， 实验用水为一级水 。 ３ ． ２ ． ２ ． ２ ． １ 　 可溶性淀粉 。 ３ ． ２ ． ２ ． ２ ． ２ 　 氢氧化钠 （ ＮａＯＨ ）。 ３ ． ２ ． ２ ． ２ ． ３ 　 含可溶性淀粉的氢氧化钠溶液 （ ５ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 将 ２０ｇ 氢氧化钠用可溶性淀粉溶液 （ ５ｇ ／ Ｌ ） 溶 解并定容至 １００ｍＬ 。 临用前配制 。 ３ ． ２ ． ２ ． ２ ． ４ 　 尿素溶液 （ ４ｍｏｌ ／ Ｌ ， ｐＨ１１ ）。 ３ ． ２ ． ２ ． ２ ． ５ 　 盐酸溶液 （ １＋１ ）： １ 份浓盐酸 （ 优级纯 ） 加 １ 份重蒸馏水混合 。 ３ ． ２ ． ２ ． ２ ． ６ 　 溴百里酚蓝水溶液 （ ０．５ｇ ／ Ｌ ）： ０．１ｇ 溴百里酚蓝 ， 加 ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ 氢氧化钠溶液 １．６ｍＬ 溶 解 ， 加水至 ２００ｍＬ 。 ３ ． ２ ． ２ ． ２ ． ７ 　 高纯氮 （ 含量 ９９．９９％ ）。 ３ ． ２ ． ２ ． ２ ． ８ 　 辛醇甲苯溶液 ： 取 １ｍＬ 辛醇与 ９９ｍＬ 甲苯混合 。 ３ ． ２ ． ２ ． ２ ． ９ 　 色氨酸标准贮备液 （ １．００ｍｇ ／ ｍＬ ）： 准确称取色氨酸 １００．０ｍｇ ， 用 ０．００５ｍｏｌ ／ Ｌ 氢氧化钠 １ 犌犅 ／ 犜 １４９２４ ． １０ — ２００８ 溶液溶解并定容至 １００ｍＬ 。 ３ ． ２ ． ２ ． ２ ． １０ 　 色氨酸标准应用液 （ ０．２０ｍｇ ／ ｍＬ ）： 准确吸取色氨酸标准贮备液 １０．０ｍＬ 于 ５０ｍＬ 容量 瓶中用水稀释至刻度 ， 使用时现配 。 ３ ． ２ ． ２ ． ３ 　 仪器 ３ ． ２ ． ２ ． ３ ． １ 　 荧光分光光度计 。 ３ ． ２ ． ２ ． ３ ． ２ 　 减压蒸发器 。 ３ ． ２ ． ２ ． ３ ． ３ 　 聚四氟乙烯管 （ ５ｍＬ ）。 ３ ． ２ ． ２ ． ４ 　 试样处理 试样粉碎后 ， 贮于试样瓶中备用 。 ３ ． ２ ． ２ ． ５ 　 分析步骤 ３ ． ２ ． ２ ． ５ ． １ 　 试样制备 ： 准确称取含粗蛋白质约 ５００ｍｇ 的试样 ， 置于聚四氟乙烯管中 。 加含可溶性淀 粉的氢氧化钠溶液 １ｍＬ ， 加入一滴辛醇 ， 将试样管放在一可密封的容器内 。 该容器内加冰 、 盐降温 ， 抽 真空 ［ １．３３×１０ ３ Ｐａ （ １０ｍｍＨｇ ） 以下 ］ 保持 １５ｍｉｎ ， 充氮气再减压 ， 反复进行三次 。 将充氮减压容器密 封 ， 放入 １１０℃ 烘箱中 ， 碱水解试样 ２２ｈ 。 试样冷却后加 ０．７ｍＬ 盐酸溶液 （ １＋１ ）， 用重蒸馏水将试样 分别洗入 ２５ｍＬ 容量瓶中 。 用溴百里酚蓝作指示剂 ， 调 ｐＨ 至中性 ， 用重蒸馏水定容至刻度 。 ３ ． ２ ． ２ ． ５ ． ２ 　 测定 ： 吸取试样液 １．０ｍＬ ， 于 １０ｍＬ 带塞刻度试管中 ， 加 ４ｍｏｌ ／ Ｌ 尿素溶液 （ ｐＨ１１ ） 稀释 至 １０ｍＬ 。 于激发波长 ２８０ｎｍ ， 发射波长 ３６０ｎｍ 下测定荧光强度 ， 从工作曲线上查出该试样中色氨酸 的含量 。 ３ ． ２ ． ２ ． ５ ． ３ 　 校准曲线的绘制 ： 取双份聚四氟乙烯试管分别取色氨酸标准应用液 ０．０ｍＬ 、 ０．５ｍＬ 、 １．５ｍＬ 、 ２．０ｍＬ ， 相当于色氨酸含量 ０．０ｍｇ 、 ０．１ｍｇ 、 ０．３ｍｇ 、 ０．４ｍｇ 。 按试样制备的同样步骤进行碱 水解 ， 以测出的标准系列的荧光强度为纵坐标 ， 以色氨酸标准含量为横坐标 ， 绘制校准曲线 。 ３ ． ２ ． ２ ． ６ 　 计算 按式 （ １ ） 计算 ： 犡 ＝ 犮 × 犳 犿 × １００ …………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犡 ——— 色氨酸含量 ， 单位为毫克每百克 （ ｍｇ ／ １００ｇ ）； 犮 ——— 从校准曲线查出的色氨酸含量 ， 单位为毫克 （ ｍｇ ）； 犳 ——— 稀释倍数 ； 犿 ——— 试样质量 ， 单位为克 （ ｇ ）。 ３ ． ２ ． ２ ． ７ 　 允许偏差 在同一实验室平行测定或重复测定结果的相对标准误差不得超过 １０％ 。 ３ ． ２ ． ３ 　 第三法 　 分光光度法 按 ＧＢ ／ Ｔ１５４００ 规定执行 。 ２ 犌犅 ／ 犜 １４９２４ ． １０ — ２００８ 书 书 书 ８００２ — ０１  ４２９４１ 犜 ／ 犅犌 中华人民共和国 国家标准 实验动物 　 配合饲料 氨基酸的测定 ＧＢ ／ Ｔ１４９２４．１０ — ２００８  中国标准出版社出版发行 北京复兴门外三里河北街 １６ 号 邮政编码 ： １０００４５ 网址 ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ 电话 ： ６８５２３９４６ 　 ６８５１７５４８ 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 各地新华书店经销  开本 ８８０×１２３０１ ／ １６ 　 印张 ０．５ 　 字数 ５ 千字 ２００９ 年 ２ 月第一版 　 ２００９ 年 ２ 月第一次印刷  书号 ： １５５０６６ · １３５７７１ 如有印装差错 　 由本社发行中心调换 版权专有 　 侵权必究 举报电话 ：（ ０１０ ） ６８５３３５３３